A ti mu Javascript kuro ninu ẹrọ aṣawakiri rẹ lọwọlọwọ. Nigbati a ba mu JavaScript kuro, diẹ ninu awọn iṣẹ ti oju opo wẹẹbu yii kii yoo ṣiṣẹ.
Ṣe ìforúkọsílẹ̀ àwọn àlàyé pàtó rẹ àti àwọn oògùn pàtó tí ó wù ọ́, a ó sì bá àwọn ìròyìn tí o fúnni mu pẹ̀lú àwọn àpilẹ̀kọ tí ó wà nínú ibi ìkópamọ́ wa, a ó sì fi ẹ̀dà PDF ránṣẹ́ sí ọ nípasẹ̀ ìmeeli ní àkókò tí ó yẹ.
Ṣàkóso ìṣípò àwọn nanoparticles iron oxide magnetic fún ìfijiṣẹ́ cytostatics tí a fojúsùn
Onkọwe Toropova Y, Korolev D, Istomina M, Shulmeyster G, Petukhov A, Mishanin V, Gorshkov A, Podyacheva E, Gareev K, Bagrov A, Demidov O
Yana Toropova,1 Dmitry Korolev,1 Maria Istomina,1,2 Galina Shulmeyster,1 Alexey Petukhov,1,3 Vladimir Mishanin,1 Andrey Gorshkov,4 Ekaterina Podyacheva,1 Kamil Gareev,2 Alexei Bagrov,5 Oleg Demidov6,71Almazov National Medical Research Center of the Ministry of Health of the Russian Federation, St. Petersburg, 197341, Russian Federation; 2 St. Petersburg Electrotechnical University “LETI”, St. Petersburg, 197376, Russian Federation; 3 Center for Personalized Medicine, Almazov State Medical Research Center, Ministry of Health of the Russian Federation, St. Petersburg, 197341, Russia Federation; 4FSBI “Influenza Research Institute” tí a dárúkọ lẹ́yìn AA Smorodintsev Ministry of Health of the Russian Federation, St. Petersburg, Russian Federation; 5 Sechenov Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation; 6 RAS Institute of Cytology, St. Petersburg, 194064, Russian Federation; 7INSERM U1231, Faculty of Medicine and Pharmacy, Bourgogne-Franche Comté University of Dijon, France Ibaraẹnisọrọ: Yana ToropovaAlmazov National Medical Research Centre, Ministry of Health of the Russian Federation, Saint-Petersburg, 197341, Russian Federation Tẹlifóònù +7 981 95264800 4997069 Imeeli [email protected] Àkọ́kọ́: Ọ̀nà tó dájú láti yanjú ìṣòro àìlera cytostatic ni lílo àwọn nanoparticles magnetic (MNP) fún ìfijiṣẹ́ oògùn tí a fojú sí. Ète: Láti lo àwọn ìṣirò láti mọ àwọn ànímọ́ tó dára jùlọ ti magnetic field tí ó ń ṣàkóso MNPs ní vivo, àti láti ṣe àyẹ̀wò bí ìfijiṣẹ́ magnetron ti MNPs sí àwọn ewú eku ní vitro àti in vivo ṣe munadoko. (MNPs-ICG) ni a lò. A ṣe àwọn ìwádìí in vivo luminescence intensity nínú àwọn ewú ewú, pẹ̀lú àti láìsí magnetic field ní ibi tí a fẹ́. Àwọn ìwádìí wọ̀nyí ni a ṣe lórí ìpele hydrodynamic kan tí Institute of Experimental Medicine ti Almazov State Medical Research Center ti Ilé-iṣẹ́ Ìlera ti Russia ṣe. Àbájáde: Lílo àwọn oofa neodymium mú kí ìkójọpọ̀ MNP pọ̀ sí i. Ní ìṣẹ́jú kan lẹ́yìn lílo MNPs-ICG sí àwọn eku tí ó ní àrùn jẹjẹrẹ, MNPs-ICG máa ń kó jọ sínú ẹ̀dọ̀. Ní àìsí àti wíwà pápá oofa, èyí fi ipa ọ̀nà ìṣelọ́pọ́ rẹ̀ hàn. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a rí ìbísí nínú ìmọ́lẹ̀ nínú àrùn jẹjẹrẹ náà ní iwájú pápá oofa, agbára ìmọ́lẹ̀ nínú ẹ̀dọ̀ ẹranko náà kò yípadà bí àkókò ti ń lọ. Ìparí: Irú MNP yìí, pẹ̀lú agbára pápá oofa tí a ṣírò, lè jẹ́ ìpìlẹ̀ fún ìdàgbàsókè ìfijiṣẹ́ àwọn oògùn cytostatic tí a ń ṣàkóso sí àwọn àsopọ àrùn jẹjẹrẹ. Àwọn ọ̀rọ̀ pàtàkì: ìwádìí fluorescence, indocyanine, àwọn nanoparticles iron oxide, ìfijiṣẹ́ magnetron ti cytostatics, ìfọkànsí tumor
Àrùn èèmọ́ jẹ́ ọ̀kan lára ​​àwọn ohun tó ń fa ikú kárí ayé. Ní àkókò kan náà, agbára ìlera àti ikú àwọn àrùn èèmọ́ ṣì wà. 1 Ìtọ́jú ìlera tí a ń lò lónìí ṣì jẹ́ ọ̀kan lára ​​​​àwọn ìtọ́jú pàtàkì fún onírúurú èèmọ́. Ní àkókò kan náà, ìdàgbàsókè àwọn ọ̀nà láti dín majele ètò ti cytostatics kù ṣì ṣe pàtàkì. Ọ̀nà tó dájú láti yanjú ìṣòro èèmọ́ rẹ̀ ni láti lo àwọn ohun èlò ìtọ́jú nano-scale láti fojú sí àwọn ọ̀nà ìfijiṣẹ́ oògùn, èyí tí ó lè pèsè ìkójọpọ̀ oògùn ní agbègbè nínú àwọn èèmọ́ láìsí pé wọ́n kójọpọ̀ wọn nínú àwọn ẹ̀yà ara àti àsopọ ara tó ní ìlera pọ̀ sí i. 2 Ọ̀nà yìí mú kí ó ṣeé ṣe láti mú kí iṣẹ́ àti ìfojúsùn àwọn oògùn kemotherapeutic lórí àwọn àsopọ èèmọ́ sunwọ̀n sí i, nígbà tí ó ń dín majele ètò wọn kù.
Láàrín onírúurú àwọn nanoparticles tí a gbé kalẹ̀ fún ìfiránṣẹ́ àwọn aṣojú cytostatic tí a fojú sí, àwọn nanoparticles magnetic (MNPs) jẹ́ ohun pàtàkì nítorí àwọn ànímọ́ kẹ́míkà, ti ẹ̀dá alààyè, àti ti magnetic characteristics tí ó yàtọ̀, èyí tí ó ń rí i dájú pé wọ́n ní agbára púpọ̀. Nítorí náà, a lè lo àwọn nanoparticles magnetic gẹ́gẹ́ bí ètò ìgbóná láti tọ́jú àwọn èèmọ́ pẹ̀lú hyperthermia (magnetic hyperthermia). A tún lè lò wọ́n gẹ́gẹ́ bí àwọn aṣojú ìwádìí (àyẹ̀wò magnetic resonance diagnosis). 3-5 Nípa lílo àwọn ànímọ́ wọ̀nyí, pẹ̀lú ìṣeéṣe ìkójọpọ̀ MNP ní agbègbè pàtó kan, nípasẹ̀ lílo pápá magnetic kan ní òde, ìfiránṣẹ́ àwọn ìpèsè oògùn tí a fojú sí ṣí ṣí ìṣẹ̀dá ètò magnetron oníṣẹ́-púpọ̀ kan láti dojúkọ cytostatics sí ibi tí èèmọ́ náà wà. Irú ètò bẹ́ẹ̀ yóò ní MNP àti àwọn pápá magnetic láti ṣàkóso ìṣíkiri wọn nínú ara. Nínú ọ̀ràn yìí, àwọn pápá magnetic ti òde àti àwọn ohun èlò magnetic tí a gbé sí agbègbè ara tí ó ní èèmọ́ náà ni a lè lò gẹ́gẹ́ bí orísun pápá magnetic. 6 Ọ̀nà àkọ́kọ́ ní àwọn àléébù pàtàkì, títí kan àìní láti lo àwọn ohun èlò pàtàkì fún ìfojúsùn magnetic ti àwọn oògùn àti àìní láti kọ́ àwọn òṣìṣẹ́ láti ṣe iṣẹ́-abẹ. Ni afikun, ọna yii ni a fi opin si nipasẹ idiyele giga ati pe o dara fun awọn èèmọ “lode” ti o sunmọ oju ara nikan. Ọna miiran ti lilo awọn ohun elo eefa n gbooro si iwọn lilo ti imọ-ẹrọ yii, ni irọrun lilo rẹ lori awọn èèmọ ti o wa ni awọn ẹya ara oriṣiriṣi. Awọn eefa ati awọn eefa ti a so pọ mọ inu stent inu-luminal le ṣee lo bi awọn ohun elo eefa fun ibajẹ èèmọ ninu awọn ẹya ara iho lati rii daju pe wọn ni agbara. Sibẹsibẹ, gẹgẹbi iwadii tiwa ti a ko tẹjade, awọn wọnyi ko to lati rii daju pe MNP duro kuro ninu ẹjẹ.
Àṣeyọrí ìfijiṣẹ́ oògùn magnetron sinmi lórí ọ̀pọ̀lọpọ̀ nǹkan: àwọn ànímọ́ ti ohun èlò tí ń gbé oofa fúnra rẹ̀, àti àwọn ànímọ́ ti orísun magnetic field (pẹ̀lú àwọn pàrámítà onígun mẹ́rin ti oofa tí ó wà títí àti agbára magnetic field tí wọ́n ń mú jáde). Ìdàgbàsókè ti ìmọ̀-ẹ̀rọ ìfijiṣẹ́ sẹ́ẹ̀lì tí ó ń darí oofa gbọ́dọ̀ ní nínú ìdàgbàsókè àwọn ohun èlò tí ń gbé oofa oofa oofa tí ó yẹ, ṣíṣàyẹ̀wò ààbò wọn, àti ṣíṣe ìlànà ìwòran tí ó ń jẹ́ kí a lè tọ́pasẹ̀ àwọn ìṣísẹ̀ wọn nínú ara.
Nínú ìwádìí yìí, a ṣe ìṣirò àwọn ànímọ́ pápá oofa tó dára jùlọ láti ṣàkóso ohun tí ń gbé oògùn nano-scale nínú ara. A tún ṣe àyẹ̀wò bí MNP ṣe lè dúró láàrín ògiri iṣan ẹ̀jẹ̀ lábẹ́ ipa ti pápá oofa tí a lò pẹ̀lú àwọn ànímọ́ ìṣirò wọ̀nyí nínú àwọn iṣan ẹ̀jẹ̀ eku tí a yà sọ́tọ̀. Ní àfikún, a ṣe àkójọpọ̀ àwọn MNP àti àwọn aṣojú fluorescent, a sì ṣe àgbékalẹ̀ ìlànà kan fún ìwòran wọn ní vivo. Lábẹ́ àwọn ipò in vivo, nínú àwọn eku àpẹẹrẹ tumor, a ṣe àyẹ̀wò bí MNP ṣe ń kójọpọ̀ nínú àwọn àsopọ tumor nígbà tí a bá ń lò wọ́n ní ọ̀nà tí ó tọ́ lábẹ́ ipa ti pápá oofa.
Nínú ìwádìí in vitro, a lo MNP ìtọ́kasí, àti nínú ìwádìí in vivo, a lo MNP tí a fi lactic acid polyester (polylactic acid, PLA) tí ó ní fluorescent agent (indolecyanine; ICG) bo. MNP-ICG wà nínú rẹ̀. Nínú ìwádìí in vitro, a lo (MNP-PLA-EDA-ICG).
A ti ṣe àpèjúwe ìṣẹ̀dá àti àwọn ohun ìní ti ara àti kẹ́míkà ti MNP ní ṣókí níbòmíràn. 7,8
Láti lè ṣe àdàpọ̀ MNPs-ICG, a kọ́kọ́ ṣe àwọn PLA-ICG conjugates. A lo àdàpọ̀ PLA-D àti PLA-L pẹ̀lú ìwọ̀n molikula 60 kDa.
Níwọ́n ìgbà tí PLA àti ICG jẹ́ àwọn ásíìdì méjèèjì, láti lè ṣe àkójọpọ̀ PLA-ICG, ó ṣe pàtàkì láti kọ́kọ́ ṣe àkójọpọ̀ spacer amino-terminated kan lórí PLA, èyí tí ó ń ran chemisorb ICG lọ́wọ́ láti di spacer náà. A lo ethylene diamine (EDA), ọ̀nà carbodiimide àti carbodiimide tí omi lè yọ́, 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDAC) láti ṣe àkójọpọ̀ spacer náà. A ṣe àkójọpọ̀ spacer PLA-EDA gẹ́gẹ́ bí a ṣe tẹ̀lé. Fi àkójọpọ̀ molar EDA tí ó ní ìlọ́po ogún àti àkójọpọ̀ molar EDAC tí ó ní ìlọ́po ogún sí 2 mL ti omi chloroform PLA 0.1 g/mL. A ṣe àkójọpọ̀ náà nínú tube ìdánwò polypropylene 15 mL lórí shaker kan ní iyàrá ìṣẹ́jú 300-1 fún wákàtí méjì. A fi ètò àkójọpọ̀ náà hàn ní Àwòrán 1. Tún àkójọpọ̀ náà ṣe pẹ̀lú àkójọpọ̀ reagents tí ó ní ìlọ́po méjì láti mú kí ètò àkójọpọ̀ náà dára síi.
Ní ìparí ìṣẹ̀dá náà, a fi centrifuge omi náà síta ní iyàrá 3000 min-1 fún ìṣẹ́jú 5 láti mú àwọn ohun tí ó ti rọ̀ jù nínú polyethylene kúrò. Lẹ́yìn náà, a fi 2 mL ti omi ICG 0.5 mg/mL nínú dimethyl sulfoxide (DMSO) kún omi 2 mL náà. A fi agitator náà sí iyàrá ìrúgbìn 300 min-1 fún wákàtí 2. Àwòrán onípele ti conjugate tí a rí hàn nínú Àwòrán 2.
Nínú 200 miligiramu MNP, a fi 4 mL PLA-EDA-ICG conjugate kún un. Lo ohun èlò ìdènà LS-220 (LOIP, Russia) láti da ìdènà náà rú fún ìṣẹ́jú 30 ní ìgbígbà 300 min-1. Lẹ́yìn náà, a fi isopropanol wẹ̀ ẹ́ ní ìgbà mẹ́ta, a sì fi ìyàtọ̀ magnetic sí i. Lo UZD-2 Ultrasonic Disperser (FSUE NII TVCH, Russia) láti fi IPA kún ìdènà náà fún ìṣẹ́jú 5-10 lábẹ́ ìgbésẹ̀ ultrasonic tí ń bá a lọ. Lẹ́yìn ìwẹ̀ IPA kẹta, a fi omi tí a ti yọ omi kúrò wẹ̀ ẹ́, a sì tún fi iyọ̀ inú iyọ̀ inú iyọ̀ inú iyọ̀ náà pẹ̀lú ìwọ̀n 2 mg/mL.
Wọ́n lo ohun èlò ZetaSizer Ultra (Malvern Instruments, UK) láti ṣe àyẹ̀wò bí MNP ṣe pín sí nínú omi tó wà nínú omi. Wọ́n lo ohun èlò amúṣẹ́ẹ̀rọ ...
Nínú ìwádìí yìí, a lo àwọn oofa tí ó wà pẹ́lú cylindrical (ìpele N35; pẹ̀lú àwọ̀ ìdábòbò nickel) àti àwọn ìwọ̀n ìpele wọ̀nyí (ìpele gígùn × ìlà opin sílíńdà): 0.5×2 mm, 2×2 mm, 3×2 mm àti 5×2 mm.
Ìwádìí in vitro nípa ìrìnnà MNP nínú ètò àwòṣe ni a ṣe lórí àtẹ̀gùn hydrodynamic kan tí Institute of Experimental Medicine ti Almazov State Medical Research Center ti Ilé-iṣẹ́ Ìlera ti Russia ṣe. Ìwọ̀n omi tí ń yíká (omi tí a ti tú jáde tàbí omi Krebs-Henseleit) jẹ́ 225 mL. Àwọn mágnẹ́ẹ̀tì cylindrical tí a ti yọ ààrò sí ni a ń lò gẹ́gẹ́ bí mágnẹ́ẹ̀tì tí ó wà títí láé. Gbé mágnẹ́ẹ̀tì náà sí orí ohun èlò tí ó wà ní 1.5 mm sí ògiri inú ti gíláàsì àárín, pẹ̀lú òpin rẹ̀ tí ó kọjú sí ìtọ́sọ́nà ti páìpù náà (ìdúró). Ìwọ̀n ìṣàn omi nínú ìlù tí a ti pa jẹ́ 60 L/h (tó bá iyára ìlà ti 0.225 m/s mu). A ń lo omi Krebs-Henseleit gẹ́gẹ́ bí omi tí ń yíká nítorí pé ó jẹ́ àfiwé ti plasma. Ìwọ̀n viscosity dynamic ti plasma jẹ́ 1.1–1.3 mPa∙s. 9 Iye MNP tí a fi sínú pápá mágnẹ́ẹ̀tì ni a pinnu nípa spectrophotometry láti inú ìṣọ̀kan irin nínú omi tí ń yíká lẹ́yìn ìdánwò náà.
Ní àfikún, a ti ṣe àwọn ìwádìí àyẹ̀wò lórí tábìlì oníṣẹ́ omi tí a ti mú sunwọ̀n síi láti mọ bí àwọn ohun èlò ẹ̀jẹ̀ ṣe ń ṣiṣẹ́. Àwọn ohun pàtàkì ti àtìlẹ́yìn hydrodynamic ni a fihàn ní Àwòrán 3. Àwọn ohun pàtàkì ti hydrodynamic stent ni ìlù dídì tí ó ń ṣe àfarawé apá ìkọjá ti ètò iṣan ẹ̀jẹ̀ àti ojò ìpamọ́ kan. Ìṣípo omi oníṣẹ́ náà ní ìbámu pẹ̀lú ìrísí module iṣan ẹ̀jẹ̀ ni a pèsè nípasẹ̀ pọ́ọ̀ǹpù peristaltic. Nígbà ìdánwò náà, máa tọ́jú ìtújáde omi àti ìwọ̀n otútù tí a nílò, kí o sì máa ṣe àkíyèsí àwọn ìlànà ètò náà (iwọ̀n otútù, ìfúnpá, ìwọ̀n ìṣàn omi, àti iye pH).
Àwòrán 3 Àwòrán block ti ètò tí a lò láti ṣe àyẹ̀wò bí odi iṣan carotid ṣe ń ṣiṣẹ́. 1-àpótí ìpamọ́, 2-peristaltic pump, 3-ẹ̀rọ fún fífi ìdádúró tí ó ní MNP sínú lupu náà, 4-flow mita, 5-pressure sensor nínú lupu náà, 6-heat exchanger, 7-yara pẹ̀lú container, 8-orísun pápá oofa, 9-ballon pẹ̀lú hydrocarbons.
Yàrá tí ó ní àpótí náà ní àpótí mẹ́ta: àpótí ńlá kan tí ó wà lóde àti àpótí kékeré méjì, tí apá ìyípo àárín náà ti ń kọjá. A fi àpótí náà sínú àpótí kékeré náà, a fi okùn so àpótí náà mọ́ àpótí kékeré náà, a sì fi wáyà tín-ín-rín so orí àpótí náà mọ́ra. A fi omi tí a ti yọ́ sí inú àpótí ńlá náà àti àpótí kékeré náà kún àlàfo tí ó wà láàárín àpótí ńlá náà àti àpótí kékeré náà, ìwọ̀n otútù náà sì dúró ṣinṣin nítorí ìsopọ̀ mọ́ ẹ̀rọ ìyípadà ooru náà. A fi omi Krebs-Henseleit kún àlàfo tí ó wà nínú àpótí kékeré náà láti mú kí àwọn sẹ́ẹ̀lì ẹ̀jẹ̀ ṣiṣẹ́ dáadáa. A tún fi omi Krebs-Henseleit kún inú àpótí náà. A lo ètò ìpèsè gaasi (carbon) láti mú omi náà gbẹ nínú àpótí kékeré nínú àpótí ìpamọ́ àti yàrá tí ó ní àpótí náà (Àwòrán 4).
Àwòrán 4 Yàrá tí a gbé àpótí náà sí. 1-Cannula fún sísún àwọn iṣan ẹ̀jẹ̀ sílẹ̀, 2-Yàrá òde, 3-Yàrá kékeré. Ọfà náà tọ́ka sí ìtọ́sọ́nà omi àpẹẹrẹ náà.
Láti mọ ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn tí ó wà nínú ògiri iṣan ara, a lo iṣan carotid eku.
Ìfilọ́lẹ̀ ìdádúró MNP (0.5mL) sínú ètò náà ní àwọn ànímọ́ wọ̀nyí: àpapọ̀ ìwọ̀n inú ojò àti páìpù ìsopọ̀ nínú ìlopo náà jẹ́ 20mL, àti ìwọ̀n inú yàrá kọ̀ọ̀kan jẹ́ 120mL. Orísun pápá oofa ìta jẹ́ oofa títí láé pẹ̀lú ìwọ̀n boṣewa ti 2×3 mm. A fi sí orí ọ̀kan lára ​​àwọn yàrá kékeré náà, ní 1 cm jìnnà sí àpótí náà, pẹ̀lú òpin kan tí ó dojúkọ ògiri àpótí náà. A pa ìwọ̀n otútù náà mọ́ ní 37°C. Agbára fifa roller náà ni a ṣètò sí 50%, èyí tí ó bá iyára 17 cm/s mu. Gẹ́gẹ́ bí ìṣàkóso, a mú àwọn àpẹẹrẹ nínú sẹ́ẹ̀lì tí kò ní oofa títí láé.
Wákàtí kan lẹ́yìn tí a ti fún ni ní ìṣọ̀kan MNP kan, a mú àyẹ̀wò omi láti inú yàrá náà. A wọ́n ìṣọ̀kan pàǹtí náà nípa lílo spectrophotometer nípa lílo Unico 2802S UV-Vis spectrophotometer (United Products & Instruments, USA). Ní ​​gbígbé ìṣọ̀kan absorption ti ìdádúró MNP yẹ̀ wò, a ṣe ìwọ̀n náà ní 450 nm.
Gẹ́gẹ́ bí ìlànà Rus-LASA-FELASA, gbogbo ẹranko ni a ń tọ́ dàgbà àti tí a ń tọ́ dàgbà ní àwọn ibi pàtó kan tí kò ní àkóràn àrùn. Ìwádìí yìí bá gbogbo ìlànà ìwà rere mu fún àwọn àyẹ̀wò àti ìwádìí ẹranko, ó sì ti gba ìfọwọ́sowọ́pọ̀ ìwà rere láti ọ̀dọ̀ Almazov National Medical Research Center (IACUC). Àwọn ẹranko náà ń mu omi ní ìlòdì sí libitum wọ́n sì ń jẹ oúnjẹ déédéé.
Ìwádìí náà ni a ṣe lórí àwọn eku NSG mẹ́wàá tí wọ́n ti fi oògùn pa, tí wọ́n sì ní àrùn tó ń dín agbára wọn kù, tí wọ́n sì ní ìwọ̀n 22 g ± 10%. Nítorí pé a ti dín agbára wọn kù, àwọn eku tí kò ní agbára agbára wọn nínú irú eku yìí ń gba àwọn sẹ́ẹ̀lì àti àsopọ̀ ènìyàn láàyè láìsí ìkọ̀sílẹ̀ ìyípadà. Àwọn tí wọ́n ti inú àwọn ẹyẹ ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ ni a yàn sí ẹgbẹ́ àwọn adánwò láìṣe àṣìṣe, a sì jọ ń bí wọn tàbí kí a fi wọ́n sí aṣọ ìbusùn àwọn ẹgbẹ́ mìíràn láti rí i dájú pé wọ́n fara hàn ní ìbámu pẹ̀lú àwọn microbiota tí ó wọ́pọ̀.
A lo ìlà sẹ́ẹ̀lì àrùn jẹjẹrẹ ènìyàn HeLa láti fi ṣe àwòṣe xenograft. A gbin àwọn sẹ́ẹ̀lì náà sínú DMEM tí ó ní glutamine (PanEco, Russia), tí a fi 10% serum ẹran ọmú ọmọ inú oyún (Hyclone, USA), 100 CFU/mL penicillin, àti 100 μg/mL streptomycin kún un. Ilé ìwòsàn Gene Expression Regulation Laboratory ti Institute of Cell Research ti Russian Academy of Sciences ló ṣe àfikún ìlà sẹ́ẹ̀lì náà. Kí a tó fún abẹ́rẹ́ náà, a yọ àwọn sẹ́ẹ̀lì HeLa kúrò nínú ike ìbílẹ̀ pẹ̀lú omi trypsin:Versene 1:1 (Biolot, Russia). Lẹ́yìn tí a bá ti fọ̀ wọ́n, a gbé àwọn sẹ́ẹ̀lì náà sí àárín gbùngbùn títí dé ìwọ̀n sẹ́ẹ̀lì 5×106 fún 200 μL, a sì fi matrix basement membrane (LDEV-FREE, MATRIGEL® CORNING®) pò wọ́n (1:1, lórí yìnyín). A fi abẹ́rẹ́ sẹ́ẹ̀lì tí a ti pèsè sínú awọ ara itan eku. Lo àwọn calipers oníná láti ṣe àkíyèsí ìdàgbàsókè èèmọ́ ní gbogbo ọjọ́ mẹ́ta.
Nígbà tí àrùn náà dé 500 mm3, wọ́n fi mágnẹ́ẹ̀tì tí ó wà títí dé inú àsopọ̀ iṣan ẹranko tí wọ́n ń ṣe àyẹ̀wò nítòsí àrùn náà. Nínú ẹgbẹ́ àyẹ̀wò (MNPs-ICG + tumor-M), wọ́n fi 0.1 mL ti ìdádúró MNP sínú àsopọ̀ iṣan ara ẹranko náà, wọ́n sì fi sí ojú ọ̀nà mágnẹ́ẹ̀tì. Wọ́n lo gbogbo ẹranko tí wọn kò tọ́jú gẹ́gẹ́ bí ìdarí (àtilẹ̀wá). Ní ​​àfikún, wọ́n lo 0.1 mL ti MNP sínú àsopọ̀ ṣùgbọ́n wọn kò fi mágnẹ́ẹ̀tì sínú rẹ̀ (MNPs-ICG + tumor-BM).
A ṣe ìwòran fluorescence ti awọn ayẹwo in vivo ati in vitro lori IVIS Lumina LT series III bioimager (PerkinElmer Inc., USA). Fun ìwòran in vitro, a fi iwọn 1 mL ti sintetiki PLA-EDA-ICG ati MNP-PLA-EDA-ICG conjugate kun awọn ihò awo. Ni akiyesi awọn abuda fluorescence ti awọ ICG, a yan àlẹmọ ti o dara julọ ti a lo lati pinnu agbara imọlẹ ti ayẹwo naa: gigun igbi iwuri ti o pọju jẹ 745 nm, ati gigun itujade jẹ 815 nm. A lo sọfitiwia Living Image 4.5.5 (PerkinElmer Inc.) lati wiwọn agbara fluorescence ti awọn ihò ti o ni conjugate ni iwọn.
A wọn agbára fluorescence àti ìkójọpọ̀ ti conjugate MNP-PLA-EDA-ICG in vivo, láìsí wíwà àti lílo pápá oofa ní ibi tí ó wù ú. A fi isoflurane pa àwọn eku náà ní oorun, lẹ́yìn náà a fi 0.1 mL ti conjugate MNP-PLA-EDA-ICG sí i láti inú iṣan ìrù. A lo àwọn eku tí a kò tọ́jú gẹ́gẹ́ bí ìdarí odi láti gba ìpìlẹ̀ fluorescent. Lẹ́yìn tí a bá ti fi conjugate sí ikùn, gbé ẹranko náà sí orí ìpele ìgbóná (37°C) nínú yàrá ti IVIS Lumina LT series III fluorescence imager (PerkinElmer Inc.) nígbà tí a bá ń mí afẹ́fẹ́ pẹ̀lú 2% isoflurane anaesthetization. Lo àlẹ̀mọ́ tí a ṣe sínú ICG (745–815 nm) fún wíwá àmì ìṣẹ́jú 1 àti ìṣẹ́jú 15 lẹ́yìn ìfisílẹ̀ MNP.
Láti ṣe àyẹ̀wò ìkójọpọ̀ conjugate nínú èèmọ́ náà, a fi ìwé bo agbègbè peritoneal ti ẹranko náà, èyí tí ó mú kí ó ṣeé ṣe láti mú ìtànṣán dídán tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ìkójọpọ̀ àwọn èròjà inú ẹ̀dọ̀ kúrò. Lẹ́yìn ìkẹ́kọ̀ọ́ ìpínkiri biodistribution ti MNP-PLA-EDA-ICG, a pa àwọn ẹranko náà nípa lílo anesthesia isoflurane tí ó pọ̀jù fún ìyàsọ́tọ̀ àwọn agbègbè èèmọ́ lẹ́yìn náà àti ìṣàyẹ̀wò iye ti ìtànṣán fluorescence. Lo software Living Image 4.5.5 (PerkinElmer Inc.) láti fi ọwọ́ ṣe àgbéyẹ̀wò àmì láti agbègbè tí a yàn. A mú ìwọ̀n mẹ́ta fún ẹranko kọ̀ọ̀kan (n = 9).
Nínú ìwádìí yìí, a kò ṣe àyẹ̀wò bí ICG ṣe ń ṣiṣẹ́ lórí MNPs-ICG. Ní àfikún, a kò fi bí àwọn nanoparticles ṣe ń ṣiṣẹ́ wéra lábẹ́ ipa àwọn oofa tí ó wà títí tí ó ní onírúurú ìrísí. Ní àfikún, a kò ṣe àyẹ̀wò ipa ìgbà pípẹ́ ti pápá oofa lórí ìdúró àwọn nanoparticles nínú àwọn àsopọ èèmọ́.
Àwọn Nanoparticles ló borí, pẹ̀lú ìwọ̀n àròpín ti 195.4 nm. Ní àfikún, ìdádúró náà ní àwọn agglomerates pẹ̀lú ìwọ̀n àròpín ti 1176.0 nm (Àwòrán 5A). Lẹ́yìn náà, a yọ ìpín náà kúrò nípasẹ̀ àlẹ̀mọ́ centrifugal kan. Agbára zeta ti àwọn particles náà jẹ́ -15.69 mV (Àwòrán 5B).
Àwòrán 5 Àwọn ànímọ́ ara ti ìdádúró náà: (A) ìpínkiri iwọn pàǹtíkì; (B) ìpínkiri pàǹtíkì ní agbára zeta; (C) Fọ́tò TEM ti àwọn pàǹtíkìkì.
Ìwọ̀n pàǹtí náà jẹ́ 200 nm ní pàtàkì (Àwòrán 5C), tí a ṣe pẹ̀lú MNP kan ṣoṣo pẹ̀lú ìwọ̀n 20 nm, àti ikarahun oníṣọ̀kan PLA-EDA-ICG pẹ̀lú ìwọ̀n elekitironi tí ó kéré síi. A lè ṣàlàyé ìṣẹ̀dá àwọn agglomerates nínú omi omi nípasẹ̀ modulus tí ó kéré síi ti agbára elekitiromotive ti àwọn nanoparticles kọ̀ọ̀kan.
Fún àwọn oofa tí ó wà títí, nígbà tí oofa bá wà nínú iwọn didun V, a pín ìfihàn integral sí àwọn integral méjì, èyí ni iwọn didun àti ojú:
Nínú ọ̀ràn àpẹẹrẹ kan tí ó ní magnetization tí ó dúró ṣinṣin, ìwọ̀n ìṣàn náà jẹ́ òdo. Lẹ́yìn náà, ìfarahàn vektọ induction magnetic yóò gba irú èyí tí ó tẹ̀lé:
Lo eto MATLAB (MathWorks, Inc., USA) fun iṣiro nọmba, nọmba iwe-aṣẹ ẹkọ ETU “LETI” 40502181.
Gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn ní Àwòrán 7 Àwòrán 8 Àwòrán 9 Àwòrán 10, pápá mágnẹ́ẹ̀tì tó lágbára jùlọ ni a ń ṣẹ̀dá nípasẹ̀ mágnẹ́ẹ̀tì tó wà ní ìsàlẹ̀ láti òpin sílíńdà náà. Ìlànà ìṣe tó munadoko dọ́gba pẹ̀lú àwòrán mágnẹ́ẹ̀tì náà. Nínú àwọn mágnẹ́ẹ̀tì cylindrical pẹ̀lú sílíńdà tí gígùn rẹ̀ tóbi ju ìwọ̀n rẹ̀ lọ, a ń rí pápá mágnẹ́ẹ̀tì tó lágbára jùlọ ní ìtọ́sọ́nà axial-radial (fún ẹ̀yà tó bá a mu); nítorí náà, ìfàmọ́ra MNP méjì ló gbéṣẹ́ jùlọ.
Àwòrán 7. Apá ti agbára ìfàsẹ́yìn oofa Bz ní ẹ̀gbẹ́ Oz ti oofa oofa náà; ìwọ̀n boṣewa oofa náà: ìlà dúdú 0.5×2mm, ìlà bulu 2×2mm, ìlà aláwọ̀ ewé 3×2mm, ìlà pupa 5×2mm.
Àwòrán 8 Ẹ̀yà induction oofa Br dúró ṣinṣin sí axis oofa Oz; ìwọ̀n boṣewa oofa naa: ìlà dúdú 0.5×2mm, ìlà bulu 2×2mm, ìlà aláwọ̀ ewé 3×2mm, ìlà pupa 5×2mm.
Àwòrán 9. Ìwọ̀n agbára ìfàsẹ́yìn oofa Bz ní ìjìnnà r láti ìpẹ̀kun ofa oofa (z=0); ìwọ̀n ìwọ̀n oofa: ìlà dúdú 0.5×2mm, ìlà búlúù 2×2mm, ìlà aláwọ̀ ewé 3×2mm, ìlà pupa 5×2mm.
Àwòrán 10 Ẹ̀yà ìfàmọ́ra oofa ní ìtọ́sọ́nà radial; ìwọ̀n oofa boṣewa: ìlà dúdú 0.5×2mm, ìlà bulu 2×2mm, ìlà aláwọ̀ ewé 3×2mm, ìlà pupa 5×2mm.
Àwọn àwòṣe hydrodynamic pàtàkì ni a lè lò láti ṣe àyẹ̀wò ọ̀nà tí MNP fi ń gbé àwọn àsopọ̀ èèmọ́ jáde, láti kó àwọn nanoparticles jọ ní agbègbè tí a fẹ́, àti láti mọ ìwà àwọn nanoparticles lábẹ́ àwọn ipò hydrodynamic nínú ètò ìṣàn ẹ̀jẹ̀. A lè lo àwọn oofa tí ó wà títí gẹ́gẹ́ bí àwọn pápá oofa ìta. Tí a bá fojú fo ìbáṣepọ̀ magnetostatic láàárín àwọn nanoparticles tí a kò sì ronú nípa àwòṣe omi oofa, ó tó láti ṣe ìṣirò ìbáṣepọ̀ láàárín oofa àti nanoparticle kan ṣoṣo pẹ̀lú ìsopọ̀ dipole-dipole.
Níbi tí m jẹ́ àkókò òògùn mágnẹ́ẹ̀tì náà, r ni rédíọ̀sì féktékìtì ojú ibi tí nanoparticle wà, àti k ni okùnfà ètò náà. Nínú ìfọwọ́sowọ́pọ̀ dipole, pápá mágnẹ́ẹ̀tì náà ní ìṣètò kan náà (Àwòrán 11).
Nínú pápá mágnẹ́ẹ̀tì kan ṣoṣo, àwọn náópùtíìkì náà kàn máa ń yípo ní ìlà agbára. Nínú pápá mágnẹ́ẹ̀tì tí kò bá ara mu, agbára máa ń ṣiṣẹ́ lórí rẹ̀:
Níbo ni àbájáde ìtọ́sọ́nà tí a fúnni wà l. Ní àfikún, agbára náà ń fa àwọn nanoparticles sí àwọn agbègbè tí kò dọ́gba jùlọ nínú pápá náà, ìyẹn ni pé, ìtẹ̀sí àti ìwọ̀n àwọn ìlà agbára náà ń pọ̀ sí i.
Nítorí náà, ó dára láti lo mágnẹ́ẹ̀tì tó lágbára tó (tàbí ẹ̀wọ̀n mágnẹ́ẹ̀tì) pẹ̀lú anisotropy axial tó hàn gbangba ní agbègbè tí àwọn èròjà náà wà.
Táblì 1 fi agbára oofa kan ṣoṣo hàn gẹ́gẹ́ bí orísun pápá oofa tó tó láti mú kí MNP dúró nínú ibùsùn iṣan ara ti pápá ohun èlò náà.